LABORATORIO Nº 2 PREPARACIÓN DE MEDIOS MICROBIOLOGICOS Y ESTERILIZACIÓN
Fabian L. Padilla H.1 Diego A. Salinas V.2
INTRODUCCIÓN
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos (Latorre, N. 2007), son una importante herramienta para el estudio y cultivo de las distintas clases demicroorganismos, ya que aunque simulan su lugar natural de hábitat, al cumplir con los requerimientos nutritivos, no son un duplicado del ambiente natural de estos, el objetivo del medio de cultivo en el laboratorio es obtener para el trabajo experimental poblaciones de microorganismos generalmente mucho mayores que las que se encuentran en la naturaleza (Pedroza, 2007). Es por esto que suelaboración debe cumplir con ciertos requisitos para lograr su cometido, entre estos la esterilización cumple un papel vital, según Kenneth, citado por Murray: “La esterilización es la destrucción completa o eliminación de todos los microorganismos vivos en un sitio o materia particular. Puede realizarse mediante incineración, tratamiento calórico no destructivo, con ciertos gases, mediante exposicióncon radiación ionizante, con algunas sustancias liquidas y mediante filtración”
Además, la esterilización nos permite asegurar el crecimiento único del microorganismo a cultivar, produciendo una mayor precisión e inocuidad en la labor experimental
MATERIALES Y MÉTODOS
Para la realización de este laboratorio se utilizo principalmente medios de cultivo deshidratados previamente elaborados por unaindustria, agua destilada, cajas petri esterilizadas, probetas, balanza de precisión, mechero y autoclave. Se prepararon en 1000 ml siguiendo la formula 3 medios de cultivo distintos; Nutrient agar (NA 28 glt ) la fórmula de este medio se da en gramos por litro:
* Extracto de carne………3 g
* Peptona……………………5 g
* Aga…………………………15 g
Con un pH final:6.8 ± 0.2 a 25 °C.
Se preparo también, standard plate count (PC 23,5 glt ), este medio pertenece a la clasificación según su composición, a Medios complejos o de composición indefinida, estos medios tienen adición de nutrientes como extracto de levadura, peptona, infusión de cerebro, extracto de carne, etc., con ellos se obtiene un medio rico nutricionalmente, aunque indefinido químicamente(Latorre, 2007) y Potato Dextdose Agar (PDA 39 glt ) Este medio es el más utilizado para el aislamiento, crecimiento y almacenamiento de hongos, pues es apropiado para numerosas especies.
Componentes:
* Papas partidas 250 g
* Dextrosa 10 g
* Agar 20 g
* Agua destilada 1000 ml
(Saavedra et al., 2005) esta es la fórmula para la preparación manual del medio, pero en la experiencia seutilizo un medio deshidratado. Para la determinación de los pesos respectivos, se utilizo la balanza de precisión no digital, puesto que tiene una mejor aproximación, por las cantidades que se necesitaban para la experiencia, la siguiente metodología no es la exacta, pero es la base para la utilizada:
1) Suspender 23 g en 1 litro de agua destilada o desmineralizada.
2) Calentar a ebullición paradisolver completamente (Aquiahuatl, 2004), siempre teniendo la precaución de no dejarlo precipitar. Luego de estar encendida la estufa y llena la olla interior del autoclave con 2 litros de agua, fue colocado el medio en la olla externa (camisa) del autoclave, posteriormente se procedió a cerrar la tapa pareando los seguros y luego de abrir el regulador de presión se dejo por un espacio de 10 minutossalir el vapor de agua por el regulador en el cual fue cerrado el paso al transcurrir dicho tiempo, se procedió entonces a retirar el conjunto de erlenmeyer y a depositar sus diferentes contenidos (AN, PDA y PC) en las ya esterilizadas cajas petri, siguiendo el procedimiento dichos medios fueron contaminados (un cabello, aliento y material orgánico de una planta) y debidamente envueltos con…
