Introducción [editar]El dogma central de la biología molecular dice que durante la síntesis de proteínas, el ADN es transcrito en ARNm, que a su vez es traducido a proteínas.[1] Una diferencia entreARNm eucariótico y procariótico es que el ARNm eucariótico puede contener intrones, secuencias no codificantes que deben ser extraídas del ARNm antes de ser traducido a proteínas. El ARNmprocariótico no tiene intrones, así que no sufre ningún proceso de corte y empalme (splicing).
A veces se quieren expresar genes eucariotas en células procariotas. Un método simple de hacerlo es insertar ADNeucariótico en un hospedador procariota, que transcribiría el ADN en ARNm y luego lo traduciría a proteínas. Pero como el ADN eucariota tiene intrones, y los procariotas carecen de mecanismos paraeliminarlos, el proceso de extracción debe realizarse antes de introducir el ADN eucariota en el hospedador (además, debe ser metilado y hay que añadirle una región promotora procariota). Este ADNdespojado de intrones es el ADN complementario, o ADNc.
Síntesis [editar]Aunque existen varios métodos de síntesis, el ADNc es sintetizado casi siempre de ARNm maduro (sin secuencias intrónicas)utilizando la enzima retrotranscriptasa. Esta enzima trabaja sobre un molde de cadena simple de ARN, creando el ADN complementario basado en la correspondencia de bases ARN (A,U, G, C) con las bases ADNcomplementarias (T, A, C, G).
Para la obtención de ADN eucariota cuyos intrones han sido eliminados:
Una célula eucariota transcribe el ADN a ARNm.
La misma célula procesa la nueva cadena de ARNmeliminando los intrones, y añadiendo una cola poli-A y un terminal GTP.
Esta cadena de ARNm maduro se extrae de la célula.
Se hibrida un oligoncleótido poli-T sobre la cola poli-A del molde deARNm maduro, ya que la retrotranscriptasa necesita un cebador de doble cadena para comenzar a trabajar.
Se añade la retrotranscriptasa, junto con las bases A, T, C y G.
La retrotranscriptasa va…
